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HHUA人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞

HHUA人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述:HHUA人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞
傳代方法:第一次建議1:2
傳代情況 :2~3天換液
凍存條件:無(wú)血清凍存液
細(xì)胞描述:本庫(kù)的細(xì)胞僅用于科研工作,未經(jīng)許可不得用于其他目的,使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。
細(xì)胞備注: 用無(wú)菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,留作過(guò)渡培養(yǎng)

產(chǎn)品型號(hào): RHHUA

所屬分類:細(xì)胞庫(kù)

更新時(shí)間:2024-04-30

詳細(xì)說(shuō)明:

HHUA人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞

HHUA人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞

傳代方法:第一次建議1:2
傳代情況 :2~3天換液
凍存條件:無(wú)血清凍存液
細(xì)胞描述:本庫(kù)的細(xì)胞僅用于科研工作,未經(jīng)許可不得用于其他目的,使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。
細(xì)胞備注: 用無(wú)菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,留作過(guò)渡培養(yǎng)

收到后處理:
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿wan全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開(kāi)外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察:未超過(guò)80%匯合度時(shí),可將瓶裝的wan全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6mlwan全培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松)

培養(yǎng)步驟:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mLwan全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的wan全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,wan全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
2、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法三:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
1)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。棄培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,進(jìn)行離心收集,1000RPM條件下離心8-10分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入到凍存液中。



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